Полиакриламид гели электрофорезы өчен саклык чаралары

· полиакриламидгель акриламид мономеры, полимеризация башлангыч материалы, катализатор, һәм тоз һәм буфер катнашмасы хокукы белән бергә булырга тиеш.

· акриламидһәм BIS (N, N '- метилен икеләтә акриламид) - мономер формасы гел матрицасы.

· Аммоний персульфат ябыштыргыч полимерлаштыру процессын башлый. Клей формалаштыру өчен суда әзерләнгән 10% аммиак персульфат эремәсе кирәк. Күпчелек мәгълүмат актив куллану кирәклеген күрсәтте. Ләкин, 10% чишелешне 4 at берничә атна дәвамында активлык югалтмыйча урнаштырырга мөмкин. 10 млга кадәр ясагыз һәм клей җыела алмаганда ташлагыз.

Киңәш: процентакриламидэзлекле клей һәм протеин клейлары бер үк түгел. Алдан ук акриламид куллансагыз: BIS эремәсе, дөрес шешә алыгыз.

· TEMED (N, N, N ', N' - тетраметил этиленедиамин) - катализатор, коңгырт шешәдә, суыткычка урнаштырылган. Клей салганчы өстәгез.

· Электрофорезда кулланылган пыяла полиакриламид электрофорезы һәрвакыт һәм аннан соң юылырга тиеш. Электрофорездан соң йомшак кисточка һәм тукымалар белән кайнар сабынлы суда юыгыз, дистилляцияләнгән су белән юыгыз һәм киптерегез.

· Дым һәм тузан буш полимер белән китерергә мөмкин. Электрофорез алдыннан пыяла тәлинкәне пыяла чистарткыч белән чистартып, йомшак кисточка белән сөртегез. Дистилляцияләнгән су белән юыгыз һәм кәгазь сөртү белән яхшылап киптерегез. Кәгазь белән сөртелгәнче 70% этанол белән чайкау киптерүне чистартырга һәм тизләтергә ярдәм итә. Акриламид үрнәкләрен бер-бер артлы өстәгез: BIS, су, буфер эремәсе, аммиак персульфаты, TEMED. Яхшы селкетегез һәм шунда ук куегыз.

Полимеризация алдыннан полиакриламидны киметергә кирәк түгел. (Акриламид күпчелекне бетерү өчен вакуумга урнаштырыла иде, чөнки кислород полимеризацияне тыя.)

Горизонталь клей ноктасы үрнәк киңәшләре.

· Ачык төстә кара кәгазь кисәген, кара фонны куегыз.
· Клей танк тутырылган буфер, коллоид өстендә.
· Әгәр кырның яктылыгы булса, утларны кабызыгыз, яктылык коллоид балксын. Pipрнәкне пипеткага сызыгыз.
· Автоматик торба җайланмасы куллану.
· 10-200 му 1 сыек хәрәкәт ноктасы үрнәктәге күпчелек пунктларда кулланылырга мөмкин. Бик кечкенә үрнәк тишекләр өчен (10μ1-дән ким), клейны эзләү өчен кулланылган озын пипетка башы уңайлырак.

· Акрын гына хәрәкәтләнүче сыеклыкны сулап, үрнәккә чумган. Ampleрнәк глицерин белән ябышып күренергә мөмкин, һәм тиз суырту пипетка башына һава күбекләрен тартырга мөмкин.

· Пипетинг башын сулаганнан соң үрнәкләр, сыеклык башын торба читенә әкрен генә күчерәчәкләр яки кәгазь сөртү сыек башны тамчылар читендә сөртәләр. Ampleрнәкне сорамас өчен сак булыгыз.

Ampleрнәкне тишеккә урнаштырыгыз

· Бераз басымны саклап калу өчен, җайланмаларны сыек башны бераз хәрәкәтләндерү.
· Буферга кертелгән торба башы, тишекләрдән бераз югарырак, уңай басымны саклый. Пипетаның очын кечкенә тишеккә кертеп була.
· Әкрен һәм тотрыклы үрнәкләр. Пипетка очлары нокта үрнәге тишеге өстенә куелган, һәм үрнәк тишеккә батыр. Ampleрнәк тишекне тутыру өчен суга батсын.
· Сыек башлы үрнәкнең соңгы тамчысы, сыеклык икенче аягына күчәчәк, әкрен генә сыек хәрәкәтне күтәрәчәк, буфердан күчә

Вертикаль клей үрнәген ничек ясарга?

· Ике пыяла кисәге арасында формалашкан вертикаль клей ноктасы үрнәк тишекләр. Бик нечкә клейда пипетка башын хәтта ике пыяла тәлинкәгә кертеп булмый. Глицеринны карагыз! Пипетка башын үрнәк тишек өстенә куегыз, һәм үрнәк тишеккә батыр.
· Нокта үрнәге, полипропилен акил гел үрнәгенең вертикаль ноктасын чиста итеп юыгыз. Полимизацияләнмәгән акриламидны һәм үрнәк тишек төбендә күренергә мөмкин суны юыгыз. Су үрнәк тишекне сизелерлек кечерәйтә ала. 25мл яки 50мл шприц һәм 18 үлчәүле энә кулланыгыз. Электрофорез буферына салыгыз һәм үрнәк тишекне яхшылап юыгыз.
· Ampleрнәк тишекне күрү кыен булырга мөмкин, ләкин шул ук вакытта калганнары җиңел. Артык тишекләр булса, буфер үрнәге бромофенол зәңгәр белән сынап карарга мөмкин.